甲、取卵方式：經陰道超音波導引下卵泡穿刺（Transvaginal Oocyte Retrieval, TVOR）

• 以經陰道超音波為導引，將細長穿刺針經陰道壁進入卵巢，準確刺入成熟卵泡。

乙、取卵過程：

• 利用負壓吸引將卵泡液與其中之卵子一併抽出，傳送至胚胎實驗室由胚胎師確認卵子是否成功回收。

丙、手術特點：

• 手術時間約 10–30 分鐘，依卵泡數量多寡而定。

• 一般在鎮靜或短效靜脈麻醉下進行，過程中患者無疼痛感。

• 為日間手術，術後觀察數小時即可返家。

1. 受精方法

甲、傳統體外受精（Conventional IVF）

• 將處理後之精子與卵子共同置於專用培養皿中，於體外模擬自然受精過程。

• 精子需自行穿透卵子透明帶與卵細胞膜完成受精。

適用對象：

• 精液分析正常或僅有輕度異常之夫婦。

優點：最接近自然受精機制。

缺點：若精子活動力不足或卵子透明帶過厚，可能導致受精失敗。

乙. 卵細胞質內單一精子注射（Intracytoplasmic Sperm Injection, ICSI）

• 由訓練有素之胚胎師利用微操作顯微設備，選取單一精子並直接注入卵子細胞質中以促進受精。

適用對象：

1. 嚴重男性不孕（如精子數低、活動力差、形態異常）
2. 使用冷凍精子或附睪/睪丸取精（如 PESA, TESA, MESA）
3. 曾有 IVF 受精失敗經驗
4. 卵子數量有限時，希望提高單一卵子的受精率

      優點：可有效克服精子相關問題。

      缺點：為高度侵入性技術，需仰賴專業操作與高價設備。

丙、受精結果評估

• 受精狀況通常於精卵媒合後 16–20 小時 評估。

• 評估標準包括：

1. 是否形成兩個前核（2 Pronuclei, 2PN） — 代表正常受精。

2. 第2極體（2nd Polar Body）是否出現 — 為卵子完成減數分裂的指標。

3. 是否發生多精子受精（3PN 或以上） — 通常視為異常胚胎，會被淘汰，不進行後續培養或移植。

三、體外培養（In Vitro Culture）

1. 緒論

在進行體外受精（IVF）或卵細胞質內單精子注射（ICSI）後，確認受精的胚胎將持續於特製培養液中培養，直至植入子宮或冷凍保存。由於自然情況下，受精至著床期間的胚胎多在輸卵管與子宮腔內的低氧環境中發育，故現代培養箱設計多模擬 5% O₂ 的生理條件，以提供穩定的發育環境並提升胚胎品質與著床率。

2. 胚胎評估方法

• 形態學評分系統：

  • 胚胎期（第 2–3 天）常採用 Veeck 分類，根據細胞數、對稱性與碎片比例進行評分。

  • 囊胚期（第 5–6 天）則以 Gardner 分級法評估內細胞團（ICM）與滋養外胚層（TE）發育情形。

• 限制性：

  • 傳統形態學評估雖為標準方法，但仍無法完全預測胚胎的染色體正常性與臨床妊娠結局。

• • 延時顯微鏡（Time-Lapse Imaging）：

  • 利用特殊培養系統持續拍攝胚胎發育歷程，可量化胚胎分裂時間點與型態變化，有助於挑選潛力較高的胚胎進行移植。

3. 冷凍保存技術

現今胚胎與卵子的冷凍保存技術已高度發展，主要分為兩大類：

（一）慢速冷凍法（Slow Freezing）

• 以低濃度冷凍保護劑預處理細胞後，透過程式控制方式逐步降低溫度（約 -0.5°C/分鐘）至 -30 至 -80°C。

• 冷卻過程促使細胞外形成冰晶，進而引導細胞脫水並提高內部保護劑濃度，最終進入液態氮（-196°C）完成冷凍。

• 成本高、程序複雜，且冰晶形成風險可能造成細胞損傷。

（二）玻璃化冷凍法（Vitrification）

• 使用高濃度冷凍保護劑（CPA）在極短時間內處理胚胎，隨即迅速投入液態氮，使水分來不及結晶，形成玻璃態結構。

• 特點為操作快速、避免冰晶生成、存活率與發育率高，已成為目前主流的冷凍保存技術。

• 自 1999 年起，臨床研究顯示其在卵子與胚胎保存上的優異效果，廣泛應用於不孕治療與妊孕性保存領域。